(资料图片仅供参考)
尽管最近取得了进展,但许多针对病毒性疾病的高度敏感的诊断测试仍然需要复杂的技术来准备样本或解释结果,这使得它们对于床旁环境或资源匮乏的地区不切实际。但是现在, ACS Central Science上的一个团队已经开发出一种灵敏的方法,可以在短短 20 分钟内分析病毒核酸,并且可以使用“夜光”蛋白质一步完成。
萤火虫的闪光、琵琶鱼的发光诱饵和浮游植物覆盖的幽灵般的蓝色海滩,都是由被称为生物发光的相同科学现象驱动的。涉及荧光素酶蛋白的化学反应会产生发光、在黑暗中发光的效果。荧光素酶蛋白已被整合到传感器中,当它们找到目标时会发出易于观察的光。这种简单性使这些类型的传感器成为即时检测的理想选择,但到目前为止,它们还缺乏临床诊断测试所需的令人难以置信的高灵敏度。被称为 CRISPR 的基因编辑技术可以提供这种能力,但它需要许多步骤和额外的专门设备来检测复杂、嘈杂样本中的低信号。因此,Maarten Merkx 及其同事希望使用 CRISPR 相关蛋白,
为确保有足够的样本 RNA 或 DNA 进行分析,研究人员进行了重组酶聚合酶扩增 (RPA),这是一种在约 100 F 的恒定温度下工作的简单方法。采用称为 LUNAS(发光核酸传感器)的新技术, 两个 CRISPR/Cas9 蛋白对病毒基因组的不同相邻部分具有特异性,每个蛋白都有一个独特的荧光素酶片段附着在它们上面。如果存在研究人员正在测试的特定病毒基因组,这两种 CRISPR/Cas9 蛋白将与目标核酸序列结合并相互靠近,从而使完整的荧光素酶蛋白在存在的情况下形成并发出蓝光一种化学底物。为了解释这种底物被用完的原因,研究人员使用了一种发绿光的对照反应。
当对从鼻拭子收集的临床样本进行测试时,RPA-LUNAS 在 20 分钟内成功检测到 SARS-CoV-2 RNA,即使浓度低至每微升 200 个拷贝。研究人员表示,LUNAS 分析法在有效且轻松地检测许多其他病毒方面具有巨大潜力。
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